Ug Musterprotokoll kosten

Posted by on 11 elokuun, 2020 in Yleinen | 0 comments

Der Adoptivtransfer tumorspezifischer Lymphozyten ist eine vielversprechende neue Strategie für die Krebsbehandlung [23], [24]. Dieser Ansatz hängt jedoch weitgehend von der tumorinfiltrierenden Lymphozytenexpansion und/oder dem T-Zellrezeptor-Gentransfer (TCR) ab [25]. In jüngerer Zeit erwiesen sich T-Lymphozyten, die Chimeric Antigen Receptor (CAR)-Moleküle tragen, in klinischen Studien als erfolgreich [9], [10], [26]. Diese Rezeptoren bestehen aus einer extrazellulären Domäne, die von einem Antikörper abgeleitet wird, der das Antigen, eine Transmembrandomäne und eine intrazelluläre Signaldomäne erkennt, die in der Lage ist, die Lymphozyten zu aktivieren. Ein solcher Rezeptor ermöglicht die Erkennung des Antigens in einer HLA-unabhängigen Weise. Trotz der schlechten Reaktion in frühen klinischen Studien, in denen CARs verwendet wurden, die nur die CD3zeta-Signaldomäne enthielten, erhöhte die Zugabe von kostenulierenden Motiven wie CD28 oder 4-1BB die Funktion und Persistenz dieser Zellen in vivo und erreichte objektive klinische Reaktionen bei mehreren Patienten (überprüft in [27]). Wichtig ist, dass es vor kurzem gezeigt wurde, dass die übertragenen Zellen mehr als ein Jahrzehnt nach der Infusion bestehen können [28]. Jüngste Berichte zeigten eine effiziente Erzeugung von CAR-exemitten T-Zellen unter Verwendung des SB-Systems [29]–[31], und dieser Ansatz wird bereits in klinischen Studien verwendet [21]. Um zu testen, ob die Lösung 1SM in der Lage war, menschliche Zellen effizient mit dem klinisch relevanten CAR 20z zu transfezieren, transfizierten wir frisches PBMC von einem gesunden Spender und bewerteten den Anteil der transgenen Expression bei 24 `h und nach der Stimulation mit bestrahlter EBV+ B lymphoblastischer L388-Zelllinie. Die Analyse an den Tagen +1, +10, +20 und +30 ergab, dass die Expression der CAR 34,7 %, 63,3, 66,4 % bzw. 83,8 % betrug, wobei der Prozentsatz und das MFI der CAR+-Zellen schrittweise zunahmen (Abbildungen 8A und 8B).

Am 20. Tag nach der CAR-Transfektion führte die Ausdehnung zytotoxischer T-Lymphozyten (CTLs) zu einer absoluten Anzahl von Lymphozyten, die 5 x 107 Zellen überstiegen, wobei 20z+-Zellen einen klaren proliferativen Vorteil gegenüber mock-elektropoierten (Neg)-Zellen hatten (Abbildung 8C). Wie in Abbildung 8D dargestellt, zeigten T-Lymphozyten, die 20z CAR exdrückten, eine hohe zytotoxische Aktivität gegen die entwickelte CD20+ NALM-6-Zelllinie im Vergleich zu Kontrollzellen, die sich auf die gleiche Weise ausdehnten, aber keine CAR exdrückten, was die Durchführbarkeit dieses Protokolls für die Erzeugung von antitumorspezifischen T-Lymphozyten zeigte. Als Einheitsdokument ist das Modellprotokoll jedoch oft ein schlechter Ersatz für einzelne Satzungen, die auf jedes Unternehmen zugeschnitten sind. In der Tat empfehlen wir es nie für alles andere als die einfachsten UG-Stiftungen und nie für GmbHs. Während es anfangs billiger ist, kann das Fehlen umfassender Rückstellungen für unerwartete Situationen zu größeren Schwierigkeiten und Ausgaben führen. Lesen Sie hier mehr über die Debatte zwischen Satzung und Musterprotokollen. Die Verwendung dieser Plattform in Kombination mit einem nicht-viralen genetischen Modifikationssystem, das in der Lage ist, eine stabile Expression des Transgens, wie das Dornröschen-Transposon (SB), zu induzieren, stellt einen interessanten Ansatz für die genetische Veränderung von T-Zellen vor. Das SB-System besteht aus einer Transposase, die flankierende, sich wiederholende Sequenzen im Transposonplasmid erkennt, das das Transgen enthält, und seine Integration in das Wirtsgenom vermittelt [20]. Es hat sich als ein Gentransfersystem mit dem Potenzial, breit in Gentransfer- und Therapieprotokollen verwendet werden, und erfüllt klinische GradeAnforderungen [21], mit hoher Effizienz in T-Zellen.